Extraction des bactéries apoplasiques à l’aide d’une méthode de pression à base de seringue

Prenez une plante d’Arabidopsis dont les feuilles sont pré-inoculées avec des bactéries pour étudier les interactions plante-microbe.

Ces bactéries prolifèrent dans l’apoplaste, l’espace intercellulaire entre les cellules végétales, formant des microcolonies.

Une fois la colonisation apoplasique établie, il faut exciser les feuilles et les placer dans une seringue sans aiguille.

Ajoutez de l’eau distillée pour recouvrir le tissu.

Insérez le ventouse, puis tenez la seringue droite, tapotez-la et ajustez le déboucheur pour libérer l’air emprisonné.

Scellez la pointe avec du parafilm pour créer une chambre fermée pour l’extraction par apoplaste.

Appliquez une pression positive en poussant le déboucheur jusqu’à ce que le tissu devienne sombre, indiquant une compression et une entrée d’eau dans les espaces intercellulaires pour déloger les bactéries.

Ensuite, appliquez une pression négative en tirant le piston pour étendre la matrice tissulaire et extraire le liquide et les bactéries.

Répétez les cycles de pression pour générer des forces de cisaillement qui perturbent les microcolonies, libérant des bactéries sans endommager les tissus végétaux.

Déverrouillez la seringue et collectez le liquide