Expression inductible de la chaîne A de la toxine ricine marquée à l’histidine dans E. coli
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:57 min • November 28th, 2025
Commencez par des colonies d’E. coli contenant un gène de polymérase T7 régulé par l’opérateur lac et un plasmide d’expression.
Le plasmide porte des gènes de résistance aux antibiotiques et la chaîne de toxine ricine A.
Le gène de résistance s’exprime constitutivement, produisant une protéine de résistance aux antibiotiques.
Le gène RTA est marqué par histidine et régulé par un promoteur de T7 et un opérateur de lac.
Inoculez les colonies dans un milieu antibiotique et incubez par secouage.
La protéine de résistance antibiotique inactive l’antibiotique, permettant la croissance sélective des bactéries porteuses de plasmides.
Transférez la culture dans un milieu complétés en antibiotiques et incubez avec des secouements pour favoriser la croissance bactérienne.
Abaissez la température de culture pour améliorer le repliement correct de la protéine RTA.
Ajoutez un inducteur pour soulager la répression des lacs. Cela déclenche l’expression de la polymérase T7, initiant la transcription des RTA et la synthèse des protéines.
Centrifugeuse pour collecter les bactéries et éliminer le surnageant.
Lavez avec un tampon, centrifugeuse, et retirez le surnageant.
Reposez les bactéries exprimant le RTA mar
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