Isolement des endospores à partir d’un échantillon environnemental par lyse ciblée de cellules végétatives

Prélève un échantillon environnemental contenant des cellules végétatives et des endospores d’une bactérie formatrice d’endospores, ainsi que d’autres bactéries.

Les endospores possèdent une couche protectrice qui les aide à survivre dans des conditions difficiles.

À l’aide d’une unité de filtration sous vide, filtrez l’échantillon pour piéger les cellules et les endospores sur une membrane.

Placez la membrane dans un plat et coupez-la en petits morceaux.

Transférez les morceaux dans un tube, ajoutez un tampon, puis agitez le tube pour libérer les cellules et les endospores.

Incubez avec agitation à haute température pour affaiblir les structures cellulaires végétatives sans endommager les endospores.

Refroidissez l’échantillon, puis ajoutez la lysozyme et incubez avec agitation. Le lysozyme perturbe la paroi cellulaire des cellules végétatives, provoquant leur rupture.

Ajoutez de l’hydroxyde de sodium et un détergent, puis incubez pour dégrader les macromolécules cellulaires et les débris tout en préservant les endospores résilientes.

Filtrez l’échantillon pour isoler les endospores. Lavez les endospores pour éliminer l’excès de réactifs, en les préparant à une analyse ultérieure.

Une fois