Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Prenons des cultures séparées de Vibrio cholerae, une bactérie pathogène, contenant trois biotypes différents : classique, type sauvage El Tor et variante d’El Tor, chacune représentant des sous-groupes génétiquement distincts.
Inoculez chaque culture dans des tubes remplis d’un milieu spécialisé pour effectuer le test Voges-Proskauer (VP).
Incubez avec des secouements pour faciliter la prolifération bactérienne.
Le type sauvage El Tor fermente le glucose dans le milieu et produit de l’acétoïne, tandis que les biotypes classiques et variants ne ferment pas.
Ensuite, ajoutez α-naphthol et hydroxyde de potassium dans chaque tube, mélangez soigneusement et incubez.
En présence d’hydroxyde de potassium, l’oxygène atmosphérique catalyse l’oxydation de l’acétoïne en diacétyl.
Le diacétyle réagit avec des composés contenant des groupes guanidine dans le milieu pour former un produit de couleur rosé-rougeâtre, dont l’intensité est renforcée par le α-naphthol.
Le développement des couleurs indique une réaction positive du VP, caractéristique du biotype El Tor sauvage, tandis que les biotypes classiques et variants ne montrent aucune formation de couleur.
Inoculez 4 millilitres de bouillon rouge de méthyle Voges-Proskauer ou MR-VP en pipettant 10 microlitres de culture préparée au cours de la nuit dans 4 millilitres de bouillon MR-VP dans un tube de culture stérile, puis incubez avec aération dans un incubateur shaker à 225 tr/min pendant 12 à 16 heures à 37 degrés Celsius. Ensuite, ajoutez 150 microlitres de 5 % de poids par volume d’alpha-naphthol et 50 microlitres d’hydroxyde de potassium à 40 % de poids par volume à 1 millilitre d’aliquotes de la culture nocturne MR-VP dans des tubes de culture stériles, respectivement.
Ensuite, faites brièvement un vortex sur les tubes. Laissez les tubes reposer à température ambiante jusqu’à quatre heures jusqu’à ce que le changement de couleur se produise.