Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:48 min • November 28th, 2025
Prenez un mélange maître contenant une polymérase d’ADN déplaçant les brins, des nucléotides et un colorant double brin liant l’ADN pour l’amplification isotherme médiée par boucle ou LAMP.
Ajoutez des amorces contenant une séquence complémentaire inversée spécifique au gène bactérien ciblé.
Distribuez le master mix dans les tubes.
Ajoutez des échantillons contenant des gabarits d’ADN bactérien dans les tubes.
Placez les tubes à l’intérieur d’un instrument LAMP.
La dénaturation initiale permet à l’amorce de se lier à l’ADN cible.
Lorsque l’ADN polymérase déplaçant le brin commence à synthétiser un nouveau brin, elle déplace le brin existant, éliminant ainsi le besoin de cycle thermique.
Le produit amplifié forme une structure en boucle due à l’appariement inverse-complémentaire.
Cette structure contient plusieurs sites de départ pour le cycle suivant, facilitant l’amplification exponentielle de l’ADN cible.
Le colorant se lie à l’ADN amplifié et émet de la fluorescence.
Surveillez la fluorescence en temps réel pour détecter la présence du gène bactérien cible dans les échantillons.
Séparez physiquement les zones utilisées pour préparer le LAMP Master Mix et ajouter les modèles d’ADN.
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