Livraison par électroporation de biomolécules fluorescentes dans les cellules bactériennes
Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 4:55 min • November 28th, 2025
Commencez par une cuvette refroidie contenant une suspension de cellules bactériennes électrocompétentes, qui sont plus sensibles à la perméabilisation membranaire.
La suspension contient également des biomolécules marquées avec des fluorophores organiques.
Appliquer une impulsion électrique haute tension pour créer des pores membranaires temporaires, permettant l’entrée de la biomolécule dans le cytoplasme.
Ajoutez un milieu riche en nutriments et transférez les cellules dans un tube. Incubez pour favoriser la réparation des membranes.
Centrifugez les cellules, puis jetez le surnageant contenant des biomolécules non intériorisées.
Resuspendez les cellules dans un tampon riche en sel contenant un détergent pour détacher les biomolécules adhérées à la surface.
Centrifugez à nouveau, jetez le surnageant et resuspendez les cellules dans le tampon.
Transférez la suspension sur un filtre et une centrifugeuse pour éliminer le flux qui contient les biomolécules non internalisées. Ensuite, rincez les cellules avec un tampon neuf et resuspendez-les.
Montez les cellules sur un coussin d’agarose et placez une gaine de protection. Les bactéries marquées par fluorescent sont prêtes à être visualisées.
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