Évaluation du rôle protecteur d’une chaperone activée par l’acide chez E. coli sous stress acide

Prenons les cultures recombinantes d’E. coli sensibles au stress environnemental.

La culture test contient un plasmide codant pour un chaperon activé par l’acide, tandis que la culture témoin ne contient que la colonne vertébrale plasmidique.

Inoculez les colonies individuelles dans des milieux riches en antibiotiques pour assurer la rétention des plasmides et incubez pour favoriser la croissance bactérienne.

Diluez les cultures dans un milieu frais contenant l’antibiotique et un inducteur pour activer l’expression de chaperones.

Faites pousser les cultures jusqu’à la phase mi-logarithmique, puis diluez pour obtenir une densité optique spécifique.

Ajoutez de l’acide pour faire baisser le pH, ce qui induit un stress acide.

Dans la culture testée, les conditions acides activent la chaperone, qui stabilise les protéines cellulaires et empêche leur agrégation. Dans la culture témoin, l’absence de chaperone provoque la dénature et l’agrégation des protéines cellulaires.

Ajoutez une base pour neutraliser le pH et stopper le stress acide.

Surveillez la croissance bactérienne en mesurant la densité optique au fil du temps.

Une croissance accrue dans la culture testée indique le rôle protecteur de l