Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:14 min • November 28th, 2025
Commencez par des colonies d’une bactérie pathogène cultivée sur un milieu d’agar riche en nutriments.
Choisissez une seule colonie, ce qui garantit une population génétiquement homogène de cellules bactériennes et réduit la variabilité lors du génotypage.
À l’aide d’une boucle d’inoculation stérile, transférez la colonie sélectionnée dans de l’eau ultrapure afin de minimiser le risque d’introduction de contaminants dans l’échantillon.
Transformez la suspension en vortex pour briser la colonie et disperser uniformément les cellules bactériennes.
Ensuite, chauffez la suspension pour perturber l’enveloppe cellulaire bactérienne, qui comprend la membrane externe, la couche de peptidoglycane et la membrane interne.
Cela provoque la lyse des cellules bactériennes qui libèrent des contenus intracellulaires, y compris de l’ADN génomique, dans l’eau.
Centrifugez la suspension à grande vitesse pour séparer les débris cellulaires de l’ADN génomique.
Transférez le surnageant dans un tube neuf pour l’application de génotypage en aval.
Pour commencer, utilisez des boucles d’inoculation stériles pour semer des cultures pures de Yersinia ruckeri sur n’importe quel type d’agar approprié sur des boîtes de
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