Extraction d’ADN génomique à partir de tissu foliaire végétal infecté par des bactéries pathogènes

Prenez une feuille infectée par Candidatus liberibacter, une bactérie pathogène.

Découpez-le en morceaux, congelez-le instantanément dans de l’azote liquide, puis broyez-le pour rompre les cellules végétales et libérer leur contenu, y compris les bactéries.

Ajoutez un tampon de lyse des noyaux et mélangez soigneusement.

Incubez à haute température pour lyser les membranes, libérant l’ADN génomique des noyaux des plantes et des cellules bactériennes.

Ajoutez l’enzyme RNase, inversez le tube pour mélanger, puis incubez pour dégrader l’ARN.

Ajoutez une solution de précipitation protéique et mélangez pour favoriser l’agrégation des protéines. Centrifugeuse pour pelleter protéines et débris cellulaires.

Transférez le surnageant dans un tube contenant de l’isopropanol et mélangez pour précipiter l’ADN en brins visibles. Centrifugeuse pour pelleter l’ADN.

Lavez la granule avec de l’éthanol pour éliminer les impuretés, séchez à l’air libre et réhydratez l’ADN.

Incubez à haute température pour solubiliser l’ADN, puis chargez un échantillon dans une microcuvette.

À l’aide d’un spectrophotomètre, mesurez la concentration d’ADN isolé.

D’abord, utilisez des ciseaux propres pour couper une feuille entière