Isolement des bactéries adaptées au stress par sélection de colonie unique

Prenez une culture bactérienne qui a été cultivée sous une condition de stress pendant une longue période.

Le stress à long terme entraîne des mutations spontanées, la sélection naturelle et la prolifération de bactéries adaptées au stress.

Pour isoler ces bactéries, placez un petit volume de la culture sur une plaque d’agar contenant le même facteur de stress et incubez.

Le facteur de stress assure la croissance uniquement des colonies bactériennes adaptées au stress.

Choisissez une seule colonie pour maintenir la pureté génétique et inoculez le milieu liquide contre le facteur de stress.

Incubez avec des secousses pour faciliter la croissance de bactéries adaptées au stress.

Utilisez un petit volume de culture pour inoculer le milieu frais avec le facteur de stress.

Simultanément, inoculez un autre milieu contenant le stresseur avec des bactéries de type sauvage ou non adaptées au stress.

Mesurez l’absorbance à intervalles réguliers comme indicateur de la croissance bactérienne.

Comparez le profil de croissance pour assurer un isolement réussi des bactéries adaptées au stress.

Préparez un milieu en plaques d’agar à 1,6 % contenant le même facteur de stress à la même concentration que dans le milieu. Placez 0,1 millilitres de culture de sortie du chémostat et faites éclore à 37 degrés Celsius pendant 16 heures. Après l’incubation, on prélève des colonies individuelles de la plaque à l’aide d’un cure-dent stérile et on les inocule dans des tubes à essai de 15 millilitres contenant le même facteur de stress et à la même concentration moyenne que dans le chimiotate.

Incubez pendant six heures. Transférez un millilitre de bouillon de culture dans une fiole Erlenmeyer de 250 millilitres contenant 50 millilitres de substrat. Récoltez 0,5 millilitre de bouillon de culture chaque heure et mesurez la densité optique à 600 nanomètres.

Comparez le taux de croissance de la déformation adaptée à celui de la déformation de type sauvage étant donné le facteur de contrainte