Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:07 min • November 28th, 2025
Commencez par un échantillon d’eau de mer contenant diverses communautés microbiennes, y compris des bactéries capables de dégrader les hydrocarbures.
Effectuer des dilutions en série de l’échantillon dans du sérum physiologique pour réduire la densité microbienne.
Ajoutez du pétrole brut à de l’eau distillée stérile et agitez le mélange pour solubiliser partiellement les composants hydrocarburés du pétrole.
Laissez le mélange se déposer, en le séparant en fractions d’huile solubles dans l’eau et insolubles dans l’eau.
Préparez des plaques d’agar sélectives en utilisant chaque fraction d’huile comme seule source de carbone pour enrichir les bactéries qui dégradent soit les hydrocarbures solubles, soit les hydrocarbures hydrophobes.
Placez les échantillons d’eau de mer dilués sur le milieu sélectif et incubez à température ambiante.
Les colonies qui émergent reposent sur des enzymes telles que l’hydroxylase et les dioxygénases pour métaboliser les hydrocarbures.
Choisissez des colonies morphologiquement distinctes et réinjectez-les sur un milieu frais contenant la même fraction pétroleuse afin d’obtenir des cultures pures de bactéries dégradant les hydrocarbures.
Cette méthode permet l’isolement sélectif des bactéries marines dégradant le pétrole.
Pour préparer un minimum de milieux contenant une fraction huile-eau soluble et une fraction huile-eau insoluble comme seule source de carbone, ajoutez 1 à 2 % de pétrole brut à 500 millilitres d’eau distillée stérile dans une fiole filtrante contenant une valve au fond. Maintenez la fiole sous agitation constante à 24 à 28 degrés Celsius à 150 fois g pendant 48 heures. Ensuite, placez la fiole sur une surface stable et attendez 10 à 20 minutes pour que la fraction soluble et insoluble se sépare.
Ensuite, ouvrir la fiole filtrante inférieure pour transférer la fraction huile-eau soluble vers une nouvelle fiole stérile, en conservant ainsi la fraction huile-eau insoluble. Ensuite, préparez deux bouteilles de médium d’agar au minimum Bushnell Haas. Autoclave.
Combiné avec la fraction soluble huile-eau comme seule source de carbone pour produire 500 millilitres de milieu agarique. Faites de même avec la fraction insoluble huile-eau et transférez environ 25 millilitres de chaque milieu sur des boîtes de Petri individuelles. Pour isoler les bactéries dégradant le pétrole, réutilisez des échantillons précédemment dilués et pipettez 100 microlitres de chaque dilution sur les boîtes de Petri contenant un milieu d’agar, puis installez-les en assiette.
N’oubliez pas de garder des contrôles négatifs pour vos plaques. Incubez les plats pendant un à trois jours à la température cible et répétez les procédures d’isolement comme précédemment.