Transfection d’un système d’expression génique inductible dans des cellules exprimant une protéine efectoire bactérienne

Testez les cellules humaines exprimant CaeB, une protéine bactérienne anti-apoptotique.

Utilisez des cellules sans CaeB comme contrôle.

Introduire un réactif de transfection complexé avec un système d’expression génique inducible par tétracycline contenant à la fois des plasmides régulateurs et de réponse.

Le plasmide régulateur code un activateur transcriptionnel et un silencieux, tandis que le plasmide de réponse code une proprotéine pro-apoptotique contrôlée par TRE.

Incubez les cellules pour faciliter l’absorption des plasmides et l’expression régulatrice des protéines.

Sans tétracycline, l’activateur reste inactif, et le silencieux réprime la transcription pilotée par TRE.

Ajoutez un analogue de tétracycline et incubez.

L’analogue permet la liaison activateur–TRE, initiant l’expression pro-apoptotique de protéines.

Dans les cellules témoins, cela déclenche un signal apoptotique, activant un marqueur apoptotique.

Dans les cellules exprimant CaeB, CaeB inhibe la signalisation apoptotique, réduisant l’activation des marqueurs.

Une activation réduite des marqueurs dans les cellules exprimant CaeB suggère que CaeB inhibe l’apoptose.

Commencez cette procédure en ensemençant des cellules HEK293