Surveillance continue du bruit biologique chez les bactéries à l’aide de la microscopie en accéléré

Commencez par une plaque de culture contenant des bactéries intégrées sous un coussinet gélifié d’agarose pour immobiliser les bactéries et soutenir la croissance de la monocouche.

Les bactéries expriment constitutivement la protéine fluorescente verte, permettant une surveillance en temps réel de l’expression génique.

Verser un gel d’agarose supplémentaire autour du tampon pour sceller l’échantillon et le laisser solidifier à température ambiante.

Scellez la plaque avec du ruban adhésif, perforez-la pour permettre l’échange gazeux, puis inversez-la pour éviter la condensation.

Incubez la plaque à basse température pour stabiliser le gel et éviter la division bactérienne.

Ensuite, appliquez de l’huile d’immersion sur l’objectif et placez la plaque sur une scène de microscope confocale.

Lancer l’imagerie en accéléré.

À mesure que la GFP mûrit progressivement, elle commence à fluorescer. Lors de la division cellulaire, ces protéines fluorescentes sont réparties entre les cellules filles, provoquant une baisse de l’intensité de fluorescence.

Cela crée un motif de fluorescence en dents sciées, et les différences dans ce motif entre cellules génétiquement identiques dans le même environnement m