Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:12 min • November 28th, 2025
Commencez par un tube placé à l’intérieur d’une chambre anaérobie contenant un milieu riche en nutriments et une fibre fermentescible préhydratée.
Les conditions de privation d’oxygène à l’intérieur du tube imitent l’environnement anaérobie du côlon humain.
Ensuite, ajoutez un échantillon fécal dilué et homogénéisé contenant des microbes intestinaux dans le tube et incubez-le.
Inversez régulièrement le tube pour mélanger les microbes avec la fibre.
Lors de l’incubation, les microbes métabolisent et fermentent anaérobies la fibre, produisant des acides gras à chaîne courte et d’autres métabolites, abaissant le pH du milieu.
Prélever des aliquotes du mélange fermenté à intervalles réguliers pour surveiller la production de métabolites et vérifier leur pH.
Centrifugez les aliquotes à basse température pour séparer la biomasse microbienne en une granule.
Transférez le surnageant contenant les métabolites et les acides gras à chaîne courte dans un tube frais.
Congeler à la fois la biomasse microbienne et le surnageant dans l’azote liquide.
Enfin, stockez les échantillons à basse température pour une analyse ultérieure.
Maintenez les tubes inoculés à 37 degrés Celsius dans la chambre anaérobie, et inversez doucement une fois toutes les heures pour resuspendre les fibres et l’inoculum. Après 3, 6, 9 ou 24 heures, retirez la bonne quantité de milieu fermenté et centrifugez les échantillons à 14 000 fois g pendant 10 minutes à quatre degrés Celsius.
Congelez immédiatement le surnageant et la pellete dans de l’azote liquide, puis après la congélation instantanée, stockez le surnageant pour l’analyse des acides gras à chaîne courte, et la pellete pour l’analyse du microbiome, à moins 80 degrés Celsius.