JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:51 min • November 28th, 2025
Prenons la culture d’une bactérie génétiquement modifiée conçue pour abriter un plasmide exprimant une protéine fluorescente sécrétoire et conférant une résistance aux antibiotiques.
Ininoculez-le dans un milieu contenant l’antibiotique et incubez-le avec des secouements pour favoriser la croissance bactérienne.
L’antibiotique garantit que seules les cellules retenant le plasmide peuvent proliférer.
Une fois la culture atteinte de la densité souhaitée, transférez-la vers un système automatisé de gestion des liquides.
Une plaque à puits profond contient des concentrations variables de nutriments essentiels, qui sont dispensés dans une plaque à micro-titre pour créer des formulations de milieux distinctes.
Inoculez chaque puits de la plaque avec la culture bactérienne.
Scellez la plaque et placez-la dans un micro-opérateur, qui maintient une température et une aération uniformes.
Les différentes formulations entraînent des variations dans la croissance bactérienne et la sécrétion de protéines fluorescentes.
Un capteur optique dans l’appareil mesure la densité et la fluorescence cellulaires, permettant de comparer la croissance bactérienne et la production de protéines fluorescentes à travers les formulations du milieu.
Stérilisez les plaques de puits profondes pour le stockage de la solution de stockage sur une table de travail en les essuyant avec 70 % d’éthanol puis en les séchant dans une hotte à flux laminaire. Commencez la culture des graines en inoculant 50 millilitres de milieu BHI contenant 25 milligrammes par litre de kanamycine avec une aliquote provenant de la banque cellulaire de travail. Placez tout le matériel de laboratoire nécessaire sur la table de travail robotisée et versez les solutions de stock dans le matériel correspondant.
Ensuite, commencez le flux de travail robotisé pour la préparation du substrat afin que la dernière étape, l’inoculation, soit atteinte à temps pour le début de la culture des graines. Prélève la culture de graines après environ deux heures pour surveiller la croissance en mesurant la densité optique à 600 nanomètres ou OD600. Continuez à surveiller la croissance à chaque heure.
Après environ cinq heures, la culture atteint un ODde 600 entre trois et quatre heures, et est utilisée pour inoculer les cultures principales. Placez la culture de graines sur la table de travail du manipulateur de liquides et poursuivez le protocole de préparation du milieu. Scellez les plaques de micro-titrage de culture après l’inoculation.
Ensuite, placez le MTP de cultivation scellé dans l’appareil Biolector. Ensuite, lance le protocole de cultivation prédéfini.