Cryoconservation à long terme des souches cyanobactériennes utilisant le glycérol ou le sulfoxyde de diméthyle

Commencez par inocular une boucle d’une souche cyanobactérienne sur un milieu de croissance. Incubez pour permettre aux cellules de croître jusqu’à la densité souhaitée.

Lavez les cellules par centrifugation et jetez le surnageant contenant les métabolites résiduels et les débris.

Résuspendez le pellet dans un petit volume de milieu de croissance pour créer une suspension concentrée.

Mélangez une aliquote de cette suspension avec du glycérol, un cryoprotecteur qui stabilise la membrane et empêche la formation de cristaux de glace lors de la congélation.

À une autre aliquote, ajoutez du diméthylsulfoxyde, un cryoprotecteur qui pénètre les cellules et inhibe la nucléation de la glace.

Conservez les échantillons à basse température, où l’activité métabolique s’arrête et où les cellules restent viables pendant de longues périodes.

Pour la revitaliser, grattez une petite quantité de biomasse congelée sur une plaque d’agar sans antibiotiques et faites une strie afin de réduire le stress et de favoriser une récupération progressive.

Cette méthode permet la cryoconservation à long terme et la renaissance des souches cyanobactériennes pour de futures études.

Pour stocker les souches sur le long terme, mettez en place une nouvelle culture de la souche en inoculant une boucle pleine de cellules dans 30 à 50 millilitres de milieu BG11. Faites pousser la culture pendant trois à quatre jours jusqu’à un OD₇₅₀ égal à 0,4 à 0,7.

Après avoir utilisé BG11 pour laver les cellules une fois, resuspendez la pastille dans environ deux millilitres de BG11. Ajoutez 0,8 millilitre des cellules concentrées dans un tube. Puis ajoutez 0,2 millilitre de glycérol stérilisé à 80 % filtré.

Dans un autre tube, ajoutez 0,93 millilitre de cellules concentrées et 0,07 millilitre de DMSO. Conservez les deux tubes à moins 80 degrés Celsius. Pour réanimer les souches, retirez le tube et utilisez un cure-dent émoussé pour gratter certaines cellules sur une plaque d’agar sans antibiotiques. Ensuite, utilisez une boucle stérile pour rayer comme d’habitude.