Modéliser la phagocytose médiée par le complément à l’aide de globules rouges opsonisés in vitro

Prenez des globules rouges de mouton (SRBC) opsonisés par IgM, avec des anticorps IgM liés aux antigènes de surface cellulaire.

Ajoutez du sérum contenant des protéines complémentaires sauf le C5.

Le complexe C1 se lie aux anticorps et devient actif.

Le C1 activé fende C4 et C2, formant la convertase C3, qui ensuite fende C3 et dépose C3b sur les SRBC.

Sans C5, C3b se dégrade en C3bi.

Ajoutez les SRBC à une culture de macrophages.

C3bi se lie au récepteur des macrophages, déclenchant la phagocytose des SRBC.

Ajoutez une solution hypotonique pour lyser et retirez les SRBC non intériorisées.

Ajoutez un tampon de lyse pour lyser les cellules et libérez l’hémoglobine des SRBC.

Introduisez un réactif de détection.

En présence d’urée, l’hémoglobine catalyse l’oxydation du diaminofluorène par le peroxyde d’hydrogène, produisant un produit coloré.

Mesurez l’absorbance du produit coloré, qui est proportionnelle aux SRBC phagocités.

Ce test modélise la phagocytose des bactéries marquées par anticorps à l’aide de SRBC opsonisées pour imiter des cibles bactériennes.

Pour un test d’opsonisation, incubez 2 fois 10 à la huitième globules rouges de mouton ou SRBC avec 50 microlitres d’immunoglobuline anti-SRBC