Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:42 min • January 30th, 2026
Prenons une suspension Staphylococcus aureus marquée fluorescentement et un tissu pulmonaire alvéolaire humain infecté par la même bactérie marquée par fluorescence.
Insérez la pointe distale de la sonde de microscopie à fluorescence confocale fibreuse dans la suspension bactérienne et balayez le scan.
Des signaux fluorescents brillants confirment le marquage des membranes bactériennes et l’activation réussie de la sonde
Enregistrez la fluorescence au fur et à mesure que la sonde traverse la suspension.
À l’aide d’un tissu dégageant la lentille imbibé de peroxyde d’hydrogène, essuyez la sonde pour éliminer les bactéries résiduelles et éviter la fluorescence de fond
Mettez la sonde nettoyée en contact direct avec le tissu et scannez la surface.
Dans les tissus, les fibres de collagène et d’élastine apparaissent sous forme d’une matrice autofluorescente, tandis que les bactéries marquées fluorescentement sont visibles sous forme de points lumineux distincts.
Les espaces alvéolaires, dépourvus de fluorescence, apparaissent comme des régions sombres.
Enregistrez une vidéo pour capturer à la fois les bactéries adhérentes au tissu et celles faiblement associées, permettant une visualisation en temps réel de l’infection bactérienne dans le tissu alvéolaire pulmonaire de l’hôte.
Pour commencer la collecte de données, cliquez sur démarrer à l’écran ou appuyez sur la pédale du pied gauche pour allumer le laser. Ensuite, imagez chacun des échantillons de suspension bactérienne. Insérez l’extrémité distale de la fibre d’imagerie FCFM et déplacez lentement la fibre à travers la suspension pour examiner l’échantillon.
Enregistrez des vidéos de n’importe quelle longueur en appuyant sur la pédale droite ou en sélectionnant les commandes d’enregistrement à l’écran pendant que la fibre se déplace lentement autour de l’échantillon. Nettoyez l’extrémité distale de la fibre d’imagerie FCFM avec du peroxyde d’hydrogène à 8 % et des tissus de nettoyage du cristallin entre les échantillons. Pour imager chaque échantillon de tissu pulmonaire, insérez l’extrémité distale de la fibre d’imagerie FCFM dans l’échantillon, assurant ainsi un contact direct entre l’extrémité de la fibre et le tissu.
Ensuite, déplacez doucement l’extrémité de la fibre d’imagerie pour examiner l’échantillon. Soulever l’extrémité de la fibre loin du tissu retirera le tissu du plan focal. Cependant, cela peut être utilisé pour imager des bactéries marquées qui ne sont pas collées au tissu.
Enregistrez des vidéos de n’importe quelle longueur en appuyant sur la pédale droite ou en sélectionnant les commandes d’enregistrement à l’écran pendant que la fibre se déplace lentement autour de l’échantillon.