Isolement des cellules épithéliales de la vessie de souris contenant des communautés bactériennes intracellulaires

Commençons par des cellules épithéliales de la vessie extraites d’une vessie de souris infectée par E. coli uropathique marqué par fluorescente.

Lors de l’infection, ces bactéries envahissent les cellules épithéliales et forment des communautés bactériennes intracellulaires, ou IBC — des structures biofilmées qui les protègent des défenses immunitaires de l’hôte.

Au microscope disséqueur, identifiez les IBC comme de grands agrégats fluorescents confinés dans des cellules épithéliales individuelles.

Assemblez un système de micropipetage buccal à l’aide d’un capillaire en verre tiré relié à une pipette aspirante pour isoler des cellules épithéliales individuelles contenant un IBC.

Trempez brièvement la pointe capillaire dans le PBS pour réduire l’absorption de liquide par les capillaires.

Positionnez le capillaire près de la cellule épithéliale fluorescente sélectionnée et appliquez une douce succion pour attirer une seule cellule contenant un IBC, évitant ainsi les cellules non infectées et les bactéries extracellulaires.

Expulsez la cellule dans un tube microcentrifuge stérile en utilisant une légère pression positive, préservant la viabilité bactérienne.

Cette méthode permet d’isoler les