Détection de l’expression du gène cible dans un cerveau de souris infecté par des bactéries

Prenons l’ARN total extrait d’un cerveau de souris infecté par des bactéries pathogènes. L’extrait contient des transcrits provenant de gènes réactifs à l’infection.

Ajoutez une enzyme dégradant l’ADN et incubez pour dégrader l’ADN génomique résiduel.

Ajoutez un mélange maître contenant l’enzyme transcriptase inverse (RT), des nucléotides et des amorces non spécifiques.

Incuber pour synthétiser de l’ADN complémentaire (ADNc).

Introduisez une température élevée pour inactiver l’enzyme RT.

Prenez un mélange maître contenant de l’ADN polymérase, des nucléotides, un colorant double brin liant l’ADN et des amorces spécifiques à un gène cible.

Ajoutez l’ADN c et appliquez de la chaleur pour dénaturer l’ADN.

L’amorce se lie à l’ADN cible, permettant la synthèse d’un nouveau brin d’ADN.

Le cycle est répété pour amplifier le gène cible.

Le colorant se lie à l’ADN amplifié et émet de la fluorescence, qui est enregistrée à la fin de chaque cycle.

L’augmentation de la fluorescence confirme l’expression du gène réactif à l’infection dans le cerveau de la souris infectée.

Infecter toutes les souris utilisant des cellules planctoniques ou des cellules à l’état de biofilm et effectuer l’euthanasie comme décr