JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:55 min • February 2nd, 2026
Commencez par un stock congelé de Mycobacterium tuberculosis, une bactérie pathogène responsable de la tuberculose pulmonaire.
Décongelez le flacon et mélangez doucement la suspension pour disperser les amas bactériens et assurer une concentration uniforme.
Diluez le volume requis dans un tampon stérile pour préparer un inocule aérosol standardisé.
Attachez une souris dans un support en maille pour limiter les mouvements, et placez-la dans la chambre d’exposition en aérosol scellée.
Chargez l’inoculum préparé dans une seringue et injectez-le dans l’unité de nébuliseur fixée à la chambre.
Activez le système d’inhalation, qui utilise de l’air comprimé pour nébuliser la suspension en fines gouttelettes respirables.
Ces gouttelettes, contenant M. tuberculosis viable, se dispersent dans l’air de la chambre.
La souris consciente inhale l’aérosol, permettant aux bactéries viables de pénétrer profondément dans les poumons et d’initier l’infection.
Le modèle murin de la tuberculose pulmonaire est désormais prêt pour des études ultérieures.
Commencez par réchauffer les stocks de Mycobacterium tuberculosis d’un titre connu de CFU. Lorsque les cellules ont décongelé, utilisez une seringue de 1 millilitre équipée d’une aiguille calibre 27 pour mélanger soigneusement la suspension cinq fois afin de disperser les amas bactériens, évitant la production d’aérosols. Selon la dose d’infection souhaitée, transférez le volume requis du stock mycobactérien dans un tube de 50 millilitres contenant du PBS stérile jusqu’à un volume final de 6 millilitres. Ensuite, placez les animaux expérimentaux individuellement dans des paniers en maille compartimentés. Placez les paniers dans la chambre circulaire à aérosol et fermez le couvercle de la chambre.
Fixez l’unité de nébuliseur Venturi aux trois joints de douille en acier inoxydable. Aspirez la suspension mycobactérienne dans une seringue de 10 millilitres, équipée d’une aiguille émoussée de calibre 18, et transportez la seringue jusqu’à la chambre aérosol dans une boîte de transport fermée. Retirez maintenant le bouchon à vis du nébuliseur et injectez soigneusement la suspension mycobactérienne dans l’unité, en veillant à éviter la génération d’aérosols.
Jetez la seringue dans un récipient contenant 2 % de Buraton, puis scellez le nébuliseur.
Faites fonctionner l’appareil d’inhalation.
Lorsque le cycle est terminé, confirmez que la suspension de mycobactéries a été complètement nébulisée.