Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez par une souris anesthésiée présentant deux plaies cutanées excisionnelles d’épaisseur complète sur le dos, avec les couches épidermique et dermique retirées chirurgicalement.
Un pansement transparent recouvre les plaies pour isoler le site et prévenir toute contamination externe.
Laissez la souris récupérer pendant une période définie.
Pendant ce temps, le sang contenant différents composants entre dans la plaie. Cela active les plaquettes, déclenchant l’assemblage d’une matrice provisoire composée de fibrine, fibronectine et protéoglycans, et initie la formation de caillots sanguins.
Réanesthésiez la souris et injectez du sérum physiologique dans chaque flanc pour maintenir l’hydratation.
Ensuite, injectez une dose définie d’une souche luminescente de Pseudomonas aeruginosa à travers le film dans chaque plaie.
Les bactéries se déposent dans la matrice provisoire, qui soutient leur attachement et leur croissance.
Ensemble, la matrice et le pansement du film créent un environnement favorable à la formation de biofilms, entraînant une infection chronique localisée.
Enregistrez la luminescence pour surveiller l’infection bactérienne.
24 heures après l’opération, peser à nouveau la souris réanesthésiée et injecter l’animal par voie sous-cutanée avec 250 microlitres de chlorure de sodium stérile préchauffé à 0,9 % sur les deux flancs.
Ensuite, chargez 100 microlitres de la suspension luminescente P. aeruginosa dans une seringue de sécurité tuberculine de 500 microlitres équipée d’une aiguille calibre 27 et injectez 40 microlitres de suspension bactérienne à travers le pansement transparent dans chaque plaie.
Assurez-vous que la suspension bactérienne est bien mélangée et que le pansement transparent est intact. Assurez-vous de percer le pansement transparent une seule fois avec l’aiguille, côté biseau vers le haut.
Ensuite, remettez la souris dans sa cage sur un coussin chauffant avec surveillance, et fournissez une pâte de compléments nutritifs riche en calories entre les granulés alimentaires au sol de la cage.