Imagerie en direct de la mort cellulaire des macrophages lors d’une infection mycobactérienne chez les embryons de poisson-zèbre

Commencez par des embryons transgéniques de poisson-zèbre exprimant des macrophages marqués fluorescentement, montés dans de l’agarose à faible fonte dans une boîte d’imagerie.

Ces embryons sont infectés par Mycobacterium marinum marqué par fluorescence par microinjection intramusculaire dans le mésencéphale, déclenchant une réponse immunitaire localisée.

Couvrir l’agarose solidifiée de milieux embryonnaires contenant des anesthésiques pour maintenir l’anesthésie et des inhibiteurs chimiques pour supprimer la pigmentation, assurant ainsi une clarté optique pour l’imagerie.

Placez la plaque dans la chambre environnementale d’un microscope confocal haute résolution.

À l’aide d’un éclairage en champ clair, localisez la région infectée.

Activez les canaux laser à fluorescence, réglez les positions de début et de fin de la pile Z, et initiez l’imagerie en accéléré.

Visualisez le macrophage infecté, rempli de bactéries fluorescentes, alors qu’il devient arrondi et immobile.

Cela indique la dégradation du cytosquelette et le début de la mort des cellules lytiques.

Avec le temps, le macrophage gonfle et se rompt, libérant le contenu cytoplasmique et les bactéries internalisées dans les tissus envi