Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez par dissocier mécaniquement les rates de souris néonatales pour générer une suspension unicellulaire.
Transférez la suspension dans un tube, centrifugeuse, et retirez le surnageant.
Résuspendez le pellet dans un tampon de lyse pour éliminer les érythrocytes.
Ajoutez le tampon, centrifugez à nouveau, et retirez le surnageant.
Resuspendez les cellules en tampon et incubez avec des microperles magnétiques recouvertes d’anticorps ciblant un récepteur exprimé sur les neutrophiles et les monocytes inflammatoires.
Centrifugez et retirez les billes non liées. Ajoutez un tampon, puis faites passer la suspension à travers une colonne ferromagnétique et appliquez un champ magnétique pour retenir les cellules liées à la bille.
Retirez le champ magnétique, éluvez les cellules avec un tampon, puis ensemenzez-les dans une plaque à puits multiples.
Ajoutez des concentrations croissantes de bactéries luminescentes à certains puits.
Incubez pour permettre aux neutrophiles et aux monocytes d’internaliser les bactéries par phagocytose.
Remplacez le milieu par un substrat contenant des antibiotiques pour éliminer les bactéries non intériorisées.
Enregistrer la luminescence à intervalles réguliers pour
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