Modéliser l’infection chez les souris néonatales à l’aide de bactéries bioluminescentes encapsulées

Commencez par des souris nouveau-nés d’âge correspondant.

Soulevez doucement la peau à l’arrière du cou de chaque chiot. Injectez sous-cutanément un chiot avec une suspension de bactéries pathogènes à faible concentration et un autre avec une suspension à haute concentration.

Ces bactéries expriment un opéron bioluminescent qui produit l’enzyme luciférase et son substrat, permettant une émission autonome de lumière.

Une capsule protectrice de polysaccharides entoure les bactéries et masque leurs antigènes de surface, empêchant ainsi la reconnaissance par les cellules immunitaires des petits.

Rendez les chiots à leur mère biologique pour les soins postnataux.

La prolifération bactérienne au site d’injection déclenche une inflammation et une perméabilité vasculaire accrue, permettant l’entrée bactérienne dans la circulation sanguine et la propagation systémique.

Placez les chiots anesthésiés sous un système d’imagerie luminescente.

La luciférase oxyde le substrat pour produire de la lumière visible, permettant la visualisation des bactéries à l’intérieur des petits.

Capturez des images au fil du temps pour comparer la croissance et la propagation bactériennes chez les chiots inoculés avec des concentrations bactériennes élevées et faibles.

Commencez par placer les chiots correspondant à l’âge dans des groupes de portées à dose élevée ou faible dans un placard de niveau de biosécurité niveau deux. Le jour 3 ou 4 postnatal, notez le poids de tous les petits avant l’inoculation.

Chargez les seringues d’insuline avec PBS ou la dose élevée ou faible dose d’E. Inoculum Coli Lux dans l’armoire de biosécurité et placez les seringues chargées sur la glace.

Placez le nouveau-né à injecter sur une surface propre dans l’armoire de biosécurité et soulevez la peau à la nuque comme pour écraser le chiot. Insérez le biseau de l’aiguille juste sous la peau, dans l’espace créé entre la peau et le muscle. Lorsque l’aiguille est palpable sous la peau, injectez 50 microlitres de l’inoculant tout en libérant simultanément la partie pincée de la peau pour éviter le reflux. Ensuite, retirez l’aiguille lentement et avec précaution.

Lorsque tous les petits ont été injectés de la même manière, il faut les rendre à leurs mères. Immédiatement après l’injection et aux moments expérimentaux appropriés par la suite, placez la cage avec E. souris néonatales infectées par coli lux et DAM dans une hotte à flux laminaire de niveau deux de biosécurité et ouvre le logiciel dans l’ordinateur micro CT. Après avoir initialisé le système et attendu que la température de l’étage se verrouille à 37 degrés Celsius et que la température du CCD se verrouille à -90 degrés Celsius, placez jusqu’à quatre pups anesthésiés sur la boîte d’imagerie dans la chambre d’imagerie, en position prone.

Fermez la porte de la chambre d’imagerie et sélectionnez l’option d’imagerie luminescente. Sélectionnez filtre ouvert puis ensuite, puis réglez le filtre d’excitation sur blocage et le filtre d’émission sur ouvert. Sélectionnez 500, 520, 560, 580, 600 et 620 nanomètres.

Ensuite, imagez les chiots avant de les remettre en cage avec la mère, en surveillant jusqu’à la récupération après anesthésie.