Détection in situ de bactéries dans les sections de tissu gingival de souris

Prendre une section gingivale de souris infectée par des bactéries pathogènes, prétraitée pour accéder à l’ADN bactérien.

Appliquez un tampon avec une sonde d’ADN marquée à la digoxigénine ciblant l’ADN bactérien.

Placez une housse et scellez pour éviter la déshydratation de l’échantillon.

Introduire de la chaleur pour dénaturer l’ADN, puis incuber dans des conditions chaudes et humides pour permettre l’hybridation par sonde.

Refroidissez la culasse et retirez la gaine de protection, puis lavez plusieurs fois avec un tampon pour retirer les sondes non reliées.

Ajoutez une solution bloqueante pour éviter la liaison non spécifique des anticorps.

Incubez avec des anticorps conjugués à l’enzyme qui se lient à la digoxigénine.

Laver pour éliminer les anticorps non liés.

Ajoutez un inhibiteur pour inactiver sélectivement l’enzyme endogène.

Appliquez un substrat qui réagit avec l’enzyme pour obtenir un précipité coloré.

Rincez à l’eau pour enlever l’excès de substrat.

Ajoutez un colorant pour colorer les noyaux.

Lavez pour enlever l’excès de colorant.

Déshydratez dans l’éthanol et traitez avec du xylène pour augmenter la transparence des tissus.

Montez la section.

Au microscope, visualisez les bactéries