Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:03 min • February 2nd, 2026
Commencez par une culture d’Agrobacterium tumefaciens cultivée dans un milieu complété avec deux antibiotiques pour prévenir la contamination et assurer la rétention des plasmides.
Les bactéries contiennent un vecteur d’expression végétale porteur d’un gène d’intérêt et un gène de résistance aux antibiotiques.
Ils contiennent également un plasmide auxiliaire avec une région de gènes de virulence nécessaires pour transmettre le gène d’intérêt dans les cellules végétales.
Transférez une portion dans un tube contenant un milieu tampon complété avec de l’acétosyringone, une molécule signal d’origine végétale, ainsi que les antibiotiques. Incubez avec des secousses.
L’acétosyringone diffuse dans la cellule, déclenche une voie de signalisation et active l’expression des gènes de virulence nécessaires au transfert du gène d’intérêt.
Transférez la culture, centrifugez pour collecter les bactéries, puis jetez le surnageant.
Ajoutez un tampon de sel et lavez les cellules à plusieurs reprises pour éliminer les antibiotiques ajoutés.
Resuspendez les bactéries dans le tampon avec de l’acétosyringone et incubez sans secousser pour maintenir l’expression des gènes de virulence.
Utilisez immédiatement la
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