Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:43 min • February 2nd, 2026
Commencez par une plaque d’agar nutritive sélective complétée par du sang contenant des globules rouges.
Strie Staphylococcus aureus (S. aureus), une bactérie pathogène Gram-positive, sur l’agar et incube.
Pendant l’incubation, les bactéries utilisent les nutriments, grandissent et forment des colonies.
S. aureus sécrète de l’hémolysine, une toxine formatrice de pores qui lyse les globules rouges de l’agar et produit des zones claires et transparentes autour des colonies, signe d’hémolyse.
Sélectionnez une colonie hémolytique, inoculez-la dans un bouillon nutritif, puis incubez-la dans des conditions rotatives pour soutenir la croissance bactérienne.
À l’aide d’un spectrophotomètre, mesurez la densité optique (OD) pour déterminer la concentration bactérienne.
D’après la lecture de l’OD, transférez une aliquote dans un bouillon nutritif frais pour diluer les cellules, puis incubez dans un bain-marie avec secouement.
Mesurez la OD à intervalles réguliers.
Un OD proche de 0,8 indique que les bactéries ont atteint la phase de croissance exponentielle avec une physiologie uniforme.
Ce S. aureus hémolytique est prêt pour des études d’interaction hôte-pathogène.
Commencez par streaker S. Souches d’Aureus d’intérêt sur des plaques d’agar sanguin à partir d’un stock de glycérol congelé et incubant les plaques à 37 degrés Celsius pendant 16 à 24 heures afin de confirmer leurs phénotypes hémolytiques en fonction de leur capacité à lyser les globules rouges et à former des zones transparentes claires.
Inoculez des isolats de colonie unique de chaque souche dans 4 millilitres de bouillon de soja tryptique, ou TSB, dans des tubes en verre stériles et faites tourner les tubes à 37 degrés Celsius pendant 16 à 24 heures dans un rouleau tubulaire à un angle d’environ 70 degrés et 70 rotations par minute. Le lendemain matin, mesurez la densité optique à 600 nanomètres, ou OD600, des cultures sur un spectrophotomètre et diluez les cellules à un OD600 de 0,05 dans 25 millilitres de TSB stérile à un rapport 5 pour 1 flasque/volume dans des flasques DeLong de 125 millilitres. Incubez les cultures dans un bain-marie à 37 degrés Celsius à 280 rotations par minute.