Étude de l’élimination par autophagie des bactéries intracellulaires in vitro

Prenez des cultures de cellules rénales de porc, dont une pré-traitée avec un inhibiteur qui augmente le pH lysosomal, altérant ainsi la dégradation autophagique-lysosomal.

Ajoutez des bactéries pathogènes et centrifugez pour renforcer le contact hôte-pathogène.

Incuber pour permettre l’invasion bactérienne et l’internalisation dans les vésicules endocytaires.

Les bactéries intériorisées consomment les nutriments de l’hôte pour se répliquer, déclenchant un stress métabolique.

Ce stress active l’autophagie, où une membrane autophagique s’étend autour de la vésicule, formant un autophagosome.

Dans les cellules non traitées, l’autophagosome cible les bactéries pour leur dégradation lysosomale.

Dans les cellules traitées par inhibiteurs, la clairance autophagique est altérée, entraînant une charge bactérienne plus élevée.

Après l’infection, lavez les cellules et appliquez un antibiotique pour éliminer les bactéries extracellulaires.

Ajoutez une enzyme pour digérer la matrice extracellulaire et déloger les cellules.

Lyser mécaniquement les cellules pour libérer les bactéries intracellulaires.

Placez les lysats pour permettre la croissance bactérienne.

Moins de colonies provenant des cellules non traitées confirment le rôle de la voie de dégradation autophagie-lysosomale dans l’élimination des bactéries intracellulaires.