Détection des métabolites fécaux humains à l’aide d’un biocapteur bactérien

Commencez par une culture de biocapteurs bactériens suspendue dans un milieu.

Ces bactéries modifiées produisent un facteur de transcription qui, en se liant à un métabolite fécal spécifique, active un promoteur associé à un gène rapporteur fluorescent.

À cette culture, ajoutez un échantillon de selles humaines filtré contenant des métabolites, tels que le lactate, impliqués dans les interactions hôte-microbiome.

Diluez ce mélange avec un milieu frais pour maintenir un volume de réaction optimal.

Incubez sans trembler pour imiter l’environnement de l’intestin humain.

Les métabolites fécaux diffusent dans la cellule bactérienne et se lient au facteur de transcription.

Ce complexe se lie au promoteur et conduit à l’expression génique du rapporteur et à la production de protéines.

Mélangez la solution pour une distribution uniforme, diluez-la dans un tampon, puis analysez-la à l’aide de la cytométrie en flux.

Lorsque les cellules bactériennes passent par un laser, la fluorescence émise par les protéines rapporteures confirme la présence du métabolite fécal spécifique.