Essai microfluidique à base de phages pour détecter la viabilité d’E. coli dans des échantillons d’eau

Commencez par un échantillon d’eau contaminée susceptible de contenir des coliformes fécals, y compris E. coli.

Effectuer une dilution en série dans de l’eau distillée pour réduire la turbidité et la charge microbienne.

Mélangez l’échantillon dilué désiré avec le milieu nutritif et chargez-le dans une puce microfluidique.

Utilisez la filtration sous vide pour capturer les bactéries sur une membrane située dans le canal serpentin de la puce.

Ajoutez un milieu nutritif dans la chambre supérieure et incubez pour améliorer la récupération bactérienne.

Remplacer le milieu par une solution de phages spécifiques à E. coli portant le gène de la luciférase.

Incuber pour permettre l’infection par phages, où l’ADN phage se réplique, dégrade l’ADN de l’hôte et forme de nouveaux phages tout en produisant de la luciférase. Ensuite, les cellules infectées se lysent pour libérer la luciférase.

Appliquez une filtration sous vide pour transférer la luciférase à une membrane de capture.

Ajoutez un substrat qui réagit avec la luciférase pour générer un signal luminescent.

À l’aide d’un tube photomultiplicateur, mesurez la luminescence, qui est proportionnelle au nombre de cellules d’E. coli viables dans l’échantillon d’eau.