JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 1:36 min • January 30th, 2026
Prenez une culture adhérente de macrophages murins.
Traitez bien le test avec un tampon contenant Wnt5A, une molécule de signalisation, et le contrôle uniquement avec un tampon.
Infecter avec un pathogène bactérien et incuber.
Dans les cellules testées, Wnt5A active une cascade de signalisation qui améliore la réorganisation du cytosquelette pour stimuler l’absorption bactérienne dans les phagosomes, tandis que les cellules témoins dépourvues de ce signal internisent moins de bactéries.
Lavez pour éliminer les bactéries non intériorisées, puis incubez avec un milieu contenant des antibiotiques pour éliminer les bactéries extracellulaires restantes.
La signalisation Wnt5A prépare les phagosomes contenant des bactéries à la fusion avec les lysosomes, ce qui permet la dégradation bactérienne.
Certaines bactéries s’échappent en rompant des phagolysosomes.
Dans les cellules témoins, une maturation limitée du phagosome entraîne une fuite accrue.
Prélever les cellules à des moments définis. Ajoutez de l’eau distillée pour induire un choc osmotique, en lysant les cellules et en libérant des bactéries intracellulaires.
Étalez les lysats sur des plaques d’agar et incubez.
Compter les colonies pour évaluer le déclin bactérien plus dépendant du temps dans les cellules traitées à Wnt5A.