Évaluation de la présentation altérée de l’antigène MHC-I dans les cellules immunitaires infectées par des bactéries

Commencez par une culture cellulaire immunitaire infectée par des bactéries pathogènes qui forment des corps d’inclusion intracellulaires.

L’infection bactérienne altère la voie de présentation de l’antigène dans les cellules immunitaires.

Prenez une culture non infectée comme témoin.

Ensuite, ajoutez un antigène protéique modèle et incubez.

Les cellules immunitaires internalisent, traitent et présentent les peptides modèles dérivés de l’antigène sur les molécules MHC-I.

Après l’incubation, lavez les cellules pour éliminer tout antigène non traité.

Fixez les cellules, puis ajoutez un agent de trempe pour neutraliser le fixateur.

Introduire les cellules T CD8+ modifiées et incuber.

Ces cellules reconnaissent le fragment d’antigène affiché sur la molécule MHC-I, s’activent et sécrètent une enzyme qui sert de marqueur de la présentation d’antigène médiée par MHC-I.

Ensuite, ajoutez un substrat qui réagit avec l’enzyme pour produire un signal colorimétrique.

Mesurez l’absorbance. Une absorption réduite dans la culture cellulaire infectée par rapport à la culture non infectée indique une efficacité de présentation de l’antigène MHC-I altérée en raison d’une infection bactérienne.