Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez par une suspension bactérienne dans un milieu nutritif.
Ajoutez la suspension à une plaque multi-puits et incubez.
Les nutriments contenus dans le milieu facilitent la croissance et l’attachement bactérien.
Les bactéries adhérées sécrètent des substances polymériques extracellulaires composées de polysaccharides, de protéines et d’ADN pour former une couche de biofilm.
Lavez-le plusieurs fois avec un tampon pour éliminer les bactéries non liées.
Inversez la plaque pour éliminer le liquide résiduel du puits et laissez le biofilm sécher.
Traiter avec un fixateur pour préserver les composants cellulaires du biofilm.
Ajoutez un colorant cationique qui se lie aux composants polymériques extracellulaires chargés négativement du biofilm.
Rincez avec du tampon et répétez plusieurs fois pour enlever le colorant non lié.
Ajoutez un solvant pour libérer le colorant lié au biofilm.
À l’aide d’un lecteur de plaques, mesurez l’intensité de couleur du colorant libéré en indiquant la formation du biofilm par les bactéries.