JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiologie
0 vues • 2:12 min • February 26th, 2026
Commencez par une plaque de milieu de croissance nématode riche en nutriments contenant une pelouse de la bactérie pathogène Aeromonas.
Transférer des vers C. elegans de stade L4 exprimant de la GFP spécifique aux muscles sur la pelouse bactérienne et incuber.
Les vers ingèrent des bactéries ainsi que des nutriments. Cela permet aux bactéries d’atteindre et de coloniser l’intestin.
Grâce à un système de sécrétion spécialisé, Aeromonas délivre des facteurs de virulence dans les cellules intestinales du ver.
Ces facteurs de virulence diffusent vers la paroi du corps, où ils perturbent les muscles, causant des dommages structurels et une nécrose.
Transférez les vers quotidiennement sur une assiette fraîche avec une pelouse bactérienne pour maintenir une exposition continue aux agents pathogènes.
Placez les vers sur un gel d’agarose complété par un agent anesthésiant pour les anesthésier, puis placez une couverture de protection.
À l’aide d’un filtre GFP, capturez des images de fluorescence à intervalles réguliers.
La perte progressive du signal GFP indique une perturbation musculaire chez C. elegans, représentant une nécrose musculaire induite par Aeromonas lors de l’interaction hôte-pathogène.
Après avoir cultivé les souches d’Aeromonas et ajusté l’absorbance selon le protocole textuel, localiser et disperser le bouillon bactérien sur les plaques NGM.
Ensuite, transférez 50 vers L4 sur chaque plaque NGM. Toutes les 24 heures, transférez les vers sur des plaques NGM fraîches. Sélectionnez au hasard 10 vers et transférez-les dans un gel d’agarose à 2 % dans un milieu M9 sur une lame.
Enfin, placez une housse sur le gel et capturez des images musculaires avec un filtre protéique fluorescent vert sur un microscope fluorescent équipé d’un appareil photo.