Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:23 min • March 31st, 2026
Commencez par des surnatants fermentés contenant des exopolysaccharides dégradés et non dégradés, ou EPS.
Ces EPS sont obtenus lors de la fermentation, où des populations bactériennes fécales distinctes dans chaque surnageant agissent différemment sur le EPS.
Repérez les surnatants près de la base d’une plaque chromatographique à couche fine pré-recouverte d’une phase stationnaire polaire.
Séchez la plaque à l’air, puis placez-la dans une chambre contenant une phase mobile de polarité inférieure à la phase stationnaire.
À mesure que la phase mobile augmente, les EPS migrent en fonction de leur polarité et de leur taille.
Les grands EPS non dégradés interagissent fortement avec la phase stationnaire et restent près de l’origine.
Les fragments plus petits et dégradés se lient faiblement et migrent vers le haut avec la phase mobile.
Retirez l’assiette et faites-la sécher à l’air libre.
Immergez la plaque dans un réactif colorant les glucides qui réagit avec l’EPS.
Faites sécher la plaque à l’air libre, puis chauffez-la pour déshydrater l’EPS et former des bandes colorées.
Une seule bande près de l’origine confirme un EPS non dégradé, tandis que plusieurs bandes confirment la dégradation de l’EPS par des bactéries.
Chargez 0,2 microlitres des surnatants fermentés sur chaque plaque d’aluminium pré-enduite de gel de silice 60 TLC et faites tourner pour étaler. Ensuite, utilisez un sèche-cheveux à air chaud pour sécher.
Immergez une extrémité des plaques échantillonnées dans 20 millilitres de solution acide formique :n-butanol :eau pendant plusieurs minutes, jusqu’à ce que l’électrophorèse s’étende presque jusqu’à l’autre extrémité. Ensuite, retirez les plaques avec une pince et séchez avec un sèche-cheveux. Ensuite, faites tremper les plaques dans le réactif à l’orcinol pendant deux minutes pour les colorer et les sécher à nouveau.
Transférez les assiettes dans un four de cuisson à 120 degrés Celsius pour chauffer pendant trois minutes. Ensuite, prenez des photos de la plaque pour évaluer la dégradation de l’EPS en mesurant les bandes TLC.