Réalisation de chromatographie en couches minces pour évaluer la dégradation des exopolysaccharides bactériens

Commencez par des surnatants fermentés contenant des exopolysaccharides dégradés et non dégradés, ou EPS.

Ces EPS sont obtenus lors de la fermentation, où des populations bactériennes fécales distinctes dans chaque surnageant agissent différemment sur le EPS.

Repérez les surnatants près de la base d’une plaque chromatographique à couche fine pré-recouverte d’une phase stationnaire polaire.

Séchez la plaque à l’air, puis placez-la dans une chambre contenant une phase mobile de polarité inférieure à la phase stationnaire.

À mesure que la phase mobile augmente, les EPS migrent en fonction de leur polarité et de leur taille.

Les grands EPS non dégradés interagissent fortement avec la phase stationnaire et restent près de l’origine.

Les fragments plus petits et dégradés se lient faiblement et migrent vers le haut avec la phase mobile.

Retirez l’assiette et faites-la sécher à l’air libre.

Immergez la plaque dans un réactif colorant les glucides qui réagit avec l’EPS.

Faites sécher la plaque à l’air libre, puis chauffez-la pour déshydrater l’EPS et former des bandes colorées.

Une seule bande près de l’origine confirme un EPS non dégradé, tandis que plusieurs bandes confirment la dégradation de l’EP