Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commençons par le surnageant produit par le microbiote intestinal humain lors de la fermentation in vitro des exopolysaccharides. Le surnageant contient des acides gras à chaîne courte déprotonée (SCFA) et d’autres métabolites.
Ajoutez de l’acide métaphosphorique pour abaisser le pH du surnageant et un vortex pour bien mélanger. Cela convertit les SCFA en leurs formes protonées, adaptées à l’analyse chromatgraphique en phase gazeuse.
Centrifugez pour séparer les débris et collecter le surnageant contenant les SCFAs et autres métabolites.
Filtrez le surnageant pour éliminer les débris résiduels et éviter les interférences avec la chromatographie.
Dans un système de chromatographie en phase gazeuse haute performance, injectez le surnageant dans l’entrée chauffée pour le vaporiser. Ensuite, mélangez la vapeur avec un gaz inerte et faites-la passer à travers une colonne de phase stationnaire polaire pour la séparation.
Les SCFA interagissent avec la phase stationnaire de la colonne et se séparent en fonction de leur volatilité, les acides à chaîne courte éluant plus tôt que les plus longs.
Identifiez les concentrations de différents SCFA en comparant les résultats avec les standards internes
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