Imagerie en accéléré de la ségrégation des chromosomes chez des bactéries marquées par fluorescence

Commencez par un coussinet d’agarose riche en nutriments sur un cadre métallique contenant des bactéries exprimant des origines chromosomatiques fluorescentes et des microsphères fluorescentes.

Le coussinet d’agarose soutient l’attachement et la mobilité bactériennes, et les microsphères fluorescentes servent de référence pour suivre la ségrégation des chromosomes.

Ajoutez de l’huile d’immersion à la lentille objective dans la chambre d’incubation préchauffée d’un microscope à champ inversé.

Placez l’échantillon au-dessus de la lentille, puis concentrez-vous sur une région contenant plusieurs bactéries et au moins une microsphère fluorescente.

Lancer l’imagerie en accéléré et capturer à la fois des images en contraste de phase et en fluorescence.

L’origine de réplication marquée par fluorescence apparaît sous forme d’un amas lumineux près d’une extrémité de la cellule.

Lors de la division, l’origine se duplique ; un groupe reste à l’extrémité d’origine tandis que l’autre groupe migre vers l’extrémité nouvellement formée de la cellule.

Cette configuration permet de suivre la ségrégation des chromosomes sur plusieurs divisions et peut être adaptée pour visualiser des processus dynamiques si