Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
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Commencez par une boîte de Petri contenant une co-culture de Bdellovibrio bacteriovorus, une bactérie prédatrice, et d’E. coli, sa proie, sous un coussinet d’agarose.
Le coussinet d’agarose maintient E. coli immobilisé, tandis que B. bacteriovorus reste mobile et envahit activement les cellules de proie.
Le prédateur exprime un marqueur cytoplasmique rouge et une balise fluorescente verte fusionnée à une sous-unité ADN polymérase pour la visualisation.
Fixez la plaque dans un support et appliquez de l’huile d’immersion à la base de la plaque et à l’objectif du microscope pour une résolution optimale.
Montez le support sur le microscope et configurez-le pour une détection de fluorescence à double canal.
Utilisez l’optique en champ clair pour localiser le plan focal et sélectionner plusieurs champs d’imagerie non superposés.
Définissez les paramètres de time-lapse pour capturer à la fois des images en champ clair et fluorescentes séquentiellement à des intervalles définis.
Cette méthode permet d’observer la prédation en commençant par l’attachement et l’invasion de la proie, suivie de la transformation des cellules de proie, de la croissance filamenteuse, de la septation, de la formation de
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