Quantification de la charge bactérienne intestinale chez le poisson-zèbre infecté par Vibrio cholerae

Commencez par un poisson-zèbre adulte infecté par une souche résistante aux antibiotiques de Vibrio cholerae. Cette bactérie pathogène exprime l’enzyme β-galactosidase et colonise le tube intestinal.

Récupérez le poisson et transférez-le dans une solution contenant une surdose d’anesthésique pour l’euthanasier.

Placez le poisson côté ventral vers le haut et maintenez-le avec des épingles.

Désinfectez l’abdomen, réalisez une incision longitudinale cutanée et deux incisions latérales vers la tête, puis fixez la peau pour exposer le tube intestinal.

Transférez le tract dans un tube d’homogénéisation contenant un tampon froid avec des billes de verre.

Incubez avec agitation, permettant aux perles de verre de perturber le tissu et de libérer les bactéries.

Diluez en série l’homogénéat, plaquez-le sur le substrat, puis incubez. Le milieu contient un substrat chromogénique de β-galactosidase ainsi qu’un antibiotique pour éliminer les contaminants.

Les bactéries expriment l’enzyme β-galactosidase, qui hydrolyse le substrat chromogénique, entraînant la formation de colonies pigmentées bleues.

Comptez les colonies pour estimer la charge bactérienne intestinale.

Lorsque l’expérience atteint son point