Colonisation intestinale et induction de diarrhée par Vibrio cholerae chez les poissons-zèbres adultes

Placez les poissons-zèbres adultes dans de l’eau d’infection stérile et ajoutez une souche pathogène de Vibrio cholerae à la densité souhaitée.

Couvrez le bécher d’un couvercle perforé pour empêcher les poissons de sauter et d’incuber.

Les poissons-zèbres ingèrent les bactéries, qui atteignent l’intestin, traversent la couche muqueuse grâce à leurs flagelles et adhèrent à l’épithélium.

Ils colonisent l’épithélium et sécrètent des toxines qui perturbent l’intégrité intestinale, entraînant des fuites d’ions, de liquides et de protéines.

Les toxines déclenchent également la sécrétion de mucus épithélial, favorisant la persistance bactérienne.

L’accumulation de liquide, de mucus et de contenu intestinal entraîne une diarrhée aqueuse, détectable par une turbidité accrue de l’eau.

Après l’incubation, recueillez les poissons et jetez l’eau infectée dans un désinfectant.

Transférez le poisson dans de l’eau stérile pour éliminer les bactéries de surface.

Collectez et transférez à nouveau les poissons dans une eau stérile pour une analyse plus approfondie.

Après avoir préparé les cultures de V. cholerae , ininoculez le poisson-zèbre par immersion. D’abord, placez quatre ou cinq poissons-zèbres dans un bécher de 400 millilitres contenant 200 millilitres d’eau stérile d’infection. Ajoutez ensuite 1 millilitre de culture de V. cholerae pour obtenir la concentration d’infection souhaitée.

Ensuite, couvrez le bécher avec un couvercle perforé. Après avoir préparé tous les béchers, transférez-les dans un incubateur à façade vitrée réglé à 28 degrés Celsius. Pour une exposition transitoire, après environ six heures, versez l’eau du bécher à travers un filet à pêche pour collecter les poissons. L’eau infectée doit être éliminée dans de l’eau de Javel pour éliminer les bactéries.

Ensuite, placez le poisson dans 200 millilitres d’eau stérile pour infection pendant cinq minutes. Après cinq minutes, faites passer cette eau dans un résille en jetant l’eau dans de l’eau de Javel. Désormais, le poisson peut aller dans un nouveau bécher propre avec 200 millilitres d’eau stérile pour infection.