Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:51 min • March 31st, 2026
Faites un inventaire d’une souche résistante aux antibiotiques de G. vaginalis, une bactérie anaérobie associée aux infections urinaires chez la souris.
Lors d’une infection urinaire initiale, l’E. coli uropathogène établit des réservoirs quiescents dans les cellules épithéliales de la vessie.
L’exposition ultérieure à G. vaginalis déclenche la libération de cellules superficielles médiée par la toxine, permettant à l’UPEC dormante de réapparaître et de provoquer des infections urinaires récurrentes.
Pour préparer l’inoculum de G. vaginalis , tracez le fond sur une plaque d’agar nutritive sans antibiotiques pour permettre la récupération bactérienne.
Incuber de façon anaérobie pour obtenir des colonies en croissance active.
Transférez une boucle de colonies denses dans un bouillon nutritif sans antibiotiques.
Incubez statiquement dans des conditions anaérobies jusqu’à atteindre la concentration bactérienne souhaitée.
Mesurez la densité optique pour estimer la concentration.
Transférez la suspension dans un tube, centrifugez pour pelleter les bactéries, jetez le surnageant, puis resuspendez dans un tampon.
Préparez des dilutions en série et placez-les sur un milieu contenant des antibiotiques afin de permettre la croissance sélective de G. vaginalis et d’éviter la contamination. Compter les colonies pour déterminer la concentration dans l’inocule.
Commencez par faire tourner le G. Une déformation vaginale d’un bouillon congelateur à moins 80 degrés Celsius dans une chambre anaérobie. Tracez les bactéries sur une plaque NYCIII sans antibiotiques. Incubez la plaque à 37 degrés Celsius de façon anaérobie pendant 24 heures.
Dans la chambre anaérobie, inoculez cinq millilitres de milieux anaérobies NYCIII avec une boucle d’un microlitre remplie de cellules de la plaque NYCIII, et incubez la culture statiquement à 37 degrés Celsius dans des conditions anaérobies pendant 18 heures. N’incluez pas d’antibiotiques dans le milieu de croissance. Déterminez le OD600 de la culture à l’aide d’un spectrophotomètre.
Ensuite, centrifuge-le à 9 600 g pendant une minute et aspire le milieu. Resuspendez le granule bactérien dans le PBS à la concentration souhaitée, puis diluez en série et placez l’inoculum.