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Commencez par Streptococcus pneumoniae cultivé dans des biofilms, un colonisateur nasopharyngé asymptomatique, suspendu dans un tampon
Administrez la suspension par voie intranasale à une souris non anesthésiée, permettant ainsi l’inhalation dans les voies respiratoires supérieures.
Dans l’épithélium nasopharyngé, les bactéries établissent un biofilm qui facilite la colonisation et supprime la production de cytokines antivirales à partir des cellules hôtes.
Après anesthésie, étendez la langue de la souris pour accéder à la trachée.
Administrez le virus de la grippe A dans la trachée pour infecter les voies respiratoires inférieures.
Après la récupération de la souris, on inocule immédiatement le virus par voie intranasale pour cibler les voies respiratoires supérieures.
L’infection virale dérègle le système immunitaire de l’hôte et endommage les tissus muqueuss, déclenchant la dispersion bactérienne dans les voies respiratoires inférieures.
Dans l’environnement pulmonaire altéré par le virus, les bactéries se transforment en agents pathogènes invasifs, provoquant une inflammation pulmonaire et une propagation systémique.
L’infection supprime également la fonction des neutrophiles, réduisant ainsi la clairvoyance bactérienne.
Ce modèle de co-infection permet d’étudier les interactions hôte-microbien.
Décongelez les aliquotes cultivées en biofilm sur glace et faites tourner à 1 700 g pendant cinq minutes. Retirez et jetez soigneusement le surnageant sans perturber la boule. Ensuite, lavez la granule en la resuspendant dans 1 millilitre de PBS et faites-la tourner à nouveau. Retirez le surnageant et resuspendez la pastille dans le volume nécessaire pour atteindre la concentration désirée.
Inoculez les six mâles mâles C57 par voie intranasale avec 5 fois 10 à la sixième unité formant la colonie ou UFC en pipettant 5 microlitres de l’inoculum dilué dans chaque naris. Après l’inoculation, tenez fermement la souris en stabilisant la tête jusqu’à ce que le volume soit inhalé. Une fois le virus décongelé, diluer le virus dans le PBS jusqu’à la concentration désirée.
Placez un lubrifiant ophtalmique sur les yeux de la souris avant l’anesthésie. Infectez immédiatement la souris anesthésiée avec 50 microlitres de 20 unités formant des plaques, ou PFU, du virus de la grippe A ou IAV par voie intratrachéale en utilisant une pince émoussée pour retirer la langue de la bouche et en pipettant le volume de liquide dans la trachée. Après la récupération, inoculez par voie intranasale 10 microlitres de 200 unités de VAU en utilisant la méthode d’inoculation décrite précédemment.