Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:16 min • March 31st, 2026
Commencez par une souris co-infectée par une bactérie pathogène et un virus.
Le virus endommage la muqueuse épithéliale des voies respiratoires supérieures de la souris, facilitant la propagation des bactéries du nasopharynx vers les poumons.
Placez les poumons de souris récoltés dans un plat contenant du sérum physiologique tamponné de phosphate, ou PBS.
Coupez les poumons en petits morceaux et mélangez bien.
Transférez la moitié du tissu pulmonaire dans un tube contenant le PBS.
Placez une sonde homogénéisatrice de tissu stérilisée à l’intérieur du tube contenant le tissu pulmonaire.
Homogénéisez le tissu pour libérer les bactéries dans le PBS.
Diluez l’homogénéation et placez les dilutions sur une plaque en agar riche en nutriments.
Incubez la plaque pour permettre la formation de colonies bactériennes.
Comptez ces colonies pour quantifier la charge bactérienne pulmonaire, qui reflète la charge bactérienne dans les poumons.
Pour la collecte pulmonaire, à l’aide de ciseaux de dissection, coupez les côtés de la cage thoracique exposée et tirez doucement les côtes vers la tête de la souris pour exposer le cœur. Insérez une aiguille de calibre 25 attachée à une seringue de 10 millilitres préremplie de PBS dans le ventricule droit et commencez à perfuser lentement. Cherchez un blanchiment des poumons comme indicateur d’une perfusion réussie.
Rince lentement pour éviter de casser le tissu pulmonaire. Soulevez le cœur avec une pince et faites une coupe pour séparer les poumons et le cœur. Une fois séparés, ramassez tous les lobes du poumon avec une pince et rince dans un plat avec du PBS stérile pour éliminer tout résidu de sang.
Dans une boîte de Petri, hachez le poumon en petits morceaux et mélangez bien. Retirez la moitié du mélange pulmonaire pour déterminer l’UFC bactérienne ou l’UFP virale et placez-la dans un tube à fond rond de 15 millilitres prérempli de 0,5 millilitre de PBS pour homogénéisation.
Pour homogénéiser le tissu collecté, nettoyez la sonde homogénéiseuse en la mettant dans 70 % d’éthanol et en allumant l’homogénéiseur à 60 % de puissance pendant 30 secondes. Répétez cette étape dans de l’eau stérile pendant 10 secondes.
Homogénéisez chaque tissu pendant 1 minute. Pour l’énumération des nombres bactériens, les dilutions en série sur les plaques d’agar sanguin. Pour calculer l’UFC total, utilisez 10 microlitres pour plaquer et notez le volume final en millilitres pour chaque échantillon. Incubez toute la nuit à 37 degrés Celsius et 5 % de dioxyde de carbone.