Why does null hypothesis testing matter for colonoid barrier validation?

Null hypothesis testing enables objective assessment of whether observed barrier function changes are statistically significant, supporting robust target validation and reducing false positives in early discovery.

How does independent variable isolation fit in colonoid monolayer studies?

Isolating variables such as differentiation inhibitors or pathogen exposure allows precise attribution of effects on epithelial barrier integrity, strengthening mechanistic insights and discovery pipeline confidence.

What do quantitative tight junction measurements enable in screening?

Quantitative assessment of tight junction formation provides actionable data for comparing compound effects, enabling reliable screening and prioritization of candidates that modulate barrier properties.

Why are replication requirements critical for cross-functional colonoid workflows?

Replication ensures reproducibility and comparability of barrier function data across teams, facilitating collaborative decision-making and reducing risk of irreproducible findings in portfolio advancement.

What statistical analysis is required before implementing barrier function assays?

Statistical analysis of barrier integrity outputs, such as tight junction quantification, is essential to validate assay performance and support data-driven go/no-go decisions in R&D workflows.

Génération d’une monocouche colonoïde humaine avec fonction barrière pour étudier les interactions hôte-pathogène

JoVE Encyclopedia of Experiments

Microbiologie

0 vues • 2:04 min • February 26th, 2026

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Commencez par une plaque à puits multiples contenant un insert de puits recouvert de collagène.

Ajoutez un milieu d’expansion au puits.

Les nutriments du milieu favorisent la prolifération cellulaire, tandis que les inhibiteurs de différenciation maintiennent un état de type tige.

Ajouter une suspension de groupes cellulaires épithéliales issus de cultures de cellules souches du côlon dans le puits et incuber.

Les cellules adhèrent à la surface recouverte de collagène et reçoivent des nutriments des compartiments supérieur et inférieur.

Les inhibiteurs empêchent la différenciation cellulaire et facilitent la prolifération des grappes cellulaires.

À l’aide d’un microscope à contraste de phase, observez la culture.

Une fois la monocouche formée, remplacer le milieu de culture par un milieu frais sans inhibiteurs de différenciation cellulaire.

Cela facilite la différenciation des cellules en cellules épithéliales du côlon mature avec des jonctions serrées.

Ces cellules sécrètent du mucus et développent une monocouche fonctionnelle qui imite la barrière intestinale physiologique pour les études d’interaction hôte-pathogène.

Pipettez 600 microlitres de milieu d’expansion dans l’espace sous chaque insert. Pipeter 100 microlitres de suspension cellulaire du flacon dans chaque insert.

Retournez la plaque dans l’incubateur de culture tissulaire et laissez-la sans être dérangée pendant au moins 12 heures. Évitez de secouer ou d’incliner brusquement l’assiette. Après l’incubation, placez la plaque sur un microscope optique à contraste de phase avec une lentille objective de 2,5 à 10 fois.

Renouveler avec un milieu de culture sans inhibiteurs pour arrêter le traitement d’inhibition. Continuez à rafraîchir le milieu tous les deux à trois jours jusqu’à la confluence.