Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 4:02 min • February 26th, 2026
Prenez des milieux contenant un antibiotique bloquant la division cellulaire.
Ininoculez-le avec des bactéries Gram-négatives en forme de bâtonnet.
Incubez avec des secousses.
En présence de l’antibiotique, les bactéries continuent de croître sans se diviser et forment de longs filaments.
Collectez la culture et centrifugez-la à basse température. Jetez le surnageant et lavez les filaments avec une solution de saccharose pour éviter la lyse.
Jetez la solution de saccharose.
Ajoutez un tampon suivi d’enzymes et d’EDTA. L’EDTA affaiblit la membrane externe, permettant à la lysozyme d’entrer et de décomposer la couche de peptidoglycane.
Cela retire la paroi cellulaire, permettant à la cellule bactérienne de rétrécir. La DNase I décompose l’ADN chromosomique libéré des cellules et empêche l’agglomération cellulaire.
Ajoutez une solution hypotonique avec un léger tourbillonnage, permettant à la cellule d’aspirer de l’eau.
Les membranes flexibles permettent à la cellule de prendre une forme sphérique appelée sphéroplaste.
Transférez une aliquote contenant les sphéroplastes dans deux tubes avec une solution isotonique refroidie pour stabiliser les sphéroplastes.
Pour préparer des sphéroplastes à E .
Consultez la transcription complète et accédez à des milliers de vidéos scientifiques