Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 3:42 min • February 26th, 2026
Prenez une culture de Streptococcus du groupe B ou GBS, un pathogène bactérien opportuniste.
Diluez la culture dans un milieu frais et incubez pour obtenir des bactéries en division active.
Transférez la culture dans un tube conique.
Centrifugez pour pelleter les bactéries, puis jetez le surnageant.
Lavez les bactéries avec un tampon.
Centrifugez à nouveau, retirez le surnageant et remettez les bactéries en tampon.
Ensuite, utilisez une souris femelle traitée aux hormones avec un épithélium vaginal préparé, plus susceptible d’être infectée.
Attachez la souris. À l’aide d’une pointe fine de pipette, dispensez la suspension de GBS dans la lumière vaginale.
Relâchez la souris, soulevez sa queue et laissez les pattes avant marcher sur une surface ferme.
Cela favorise la rétention de l’inocule dans la lumière vaginale, favorisant l’adhésion au SGB.
Inspectez l’ouverture vaginale pour détecter un reflux d’inocule.
Les bactéries adhérées colonisent la surface épithéliale vaginale et établissent une infection.
Le modèle murin avec infection vaginale est prêt pour des études complémentaires.
Le jour même de l’injection, cultivez une culture liquide de cinq millilitres, toute la nuit, de la souche GBS d’intérêt dans le bouillon Todd Hewitt, ou THB, à 37 degrés Celsius.
Le lendemain matin, sous-cultivez le GBS à un volume de 1 à 10 dans du THB frais pour une incubation de deux à trois heures à 37 degrés Celsius, jusqu’à ce que la bactérie atteigne la phase mi-logarithmique. Ensuite, transférez la sous-culture dans un tube conique stérile de 15 millilitres, puis centrifugez les cellules bactériennes. Resuspendez la pellete dans 200 microlitres de PBS stérile.
Ensuite, on augmente le volume total de la suspension à 1 millilitre de PBS pour 10 souris, pour atteindre un ODde 600 de 0,4 dans un nouveau tube de culture de 5 millilitres. Transférez la culture dans un nouveau tube de 15 millilitres, puis re-pelletez la bactérie. Ensuite, resuspendez les cellules dans PBS à un dixième du volume initial.
Réservez 50 microlitres de la bactérie pour dilution et plaque en série sur agar THB, afin de déterminer l’UFC exact de l’inoculum. Ensuite, on prélève 10 microlitres de GBS dans une pointe de pipette à chargement gel de 200 microlitres, et on fixe manuellement la peau lâche au niveau du col du cou du premier animal entre le pouce et l’index, puis l’immobilisation de la queue. Insérez la pointe de la pipette de 5 à 10 millimètres dans la lumière vaginale, et distribuez tout le volume de l’inocule.
Ensuite, relâchez immédiatement la peau du cou et soulevez la queue pour soulever l’arrière de l’animal, tout en marchant les pattes avant sur une surface dure. Après une minute, inspectez visuellement l’ouverture vaginale pour détecter un reflux d’inocule.