Encyclopédie des expériences JoVE
Microbiologie
0 vues • 2:34 min • February 26th, 2026
Prenons une souris femelle colonisée vaginalement par Streptococcus du groupe B ou GBS, un pathogène bactérien opportuniste du tractus vaginal.
Maîtrisez la souris et insérez un tampon humidifié dans la lumière vaginale.
Faites doucement tourner le couvette tout en appliquant une légère pression sur la paroi vaginale pour déloger les bactéries à la surface.
Immergez le prélèvement dans un tampon et agitez pour suspendre les bactéries.
Diluer en série la suspension dans le tampon et la plaquer sur une agar différentielle chromogénique contenant un substrat lié à un chromogène.
Incubez pour permettre la croissance bactérienne.
Lors de l’incubation, le SGB exprime une enzyme spécifique qui hydrolyse le substrat chromogénique.
Le chromogène libéré subit une oxydation et une dimérisation spontanées, formant un composé de couleur rose ou mauve.
Cela donne lieu à des colonies de GBS roses ou mauves, visuellement distinctes des autres colonies bactériennes.
Compter les colonies pour quantifier la charge de GBS et évaluer sa persistance dans le modèle murin.
Juste avant de prélever le coton dans le PBS, et retenir une des souris comme je viens de le démontrer.
Insérez le prélèvement à 10 millimètres dans le lumen vaginal, puis faites pivoter doucement quatre fois dans le sens des aiguilles d’une montre, et quatre fois dans le sens antihoraire, tout en appliquant une légère pression sur la paroi vaginale.
Placez le prélèvement dans un tube microcentrifuge de 1,5 millilitre contenant 100 microlitres de PBS, puis faites passer le tube en vortex et en prévoyant pendant environ 15 secondes pour libérer les bactéries des fibres de coton. Ensuite, diluez en série chaque échantillon dans le PBS, et placez 20 microlitres de dilutions de 1 à 10 à 10 000 dilutions sur une plaque d’agar différentielle, préparée selon les instructions du fabricant, pour incubation à 37 degrés Celsius pendant 24 heures. Les colonies de GBS apparaîtront soit en rose vif, soit en mauve.