Quantification de la suppression du biofilm induite par les enzymes chez les bactéries pathogènes

Prenez une microplaque contenant des puits de contrôle et de traitement, chacun inoculé avec une bactérie pathogène formatrice de biofilms.

Les puits de traitement contiennent une enzyme qui perturbe la formation de biofilms.

Incuber dans des conditions micro-anaérobies pour créer un environnement pauvre en oxygène. Cela favorise la sécrétion de molécules de signalisation bactériennes qui médiatisent l’adhésion à la surface. Dans les puits de traitement, l’enzyme dégrade ces molécules, réduisant ainsi l’attachement bactérien.

Lavez les puits pour éliminer les cellules non adhérentes.

Introduisez un substrat frais et incubez. Les bactéries adhérées prolifèrent et sécrètent des substances polymériques extracellulaires, qui forment la matrice de biofilms.

Retirez le substrat et lavez les puits.

Ajoutez un colorant cationique et incubez pour permettre la liaison aux composants du biofilm chargés négativement.

Lavez pour enlever la teinture non liée.

Incubez avec un solvant en agitation pour libérer le colorant lié dans la solution.

Mesurez la densité optique ou OD pour quantifier la biomasse du biofilm.

Une OD plus faible dans les puits de traitement reflète une formation de biofilm réduite, rés