Détection des saccharibactéries en culture binaire utilisant la réaction en chaîne par polymérase

Commencez par une culture d’Actinomyces infectée par des saccharibactéries.

Les saccharibactéries, une bactérie parasite ultrapetite, et son hôte forment une culture binaire.

Ajouter une aliquote de la culture infectée dans un tube PCR contenant des réactifs d’amplification avec un colorant de suivi de l’électrophorèse et des amorces spécifiques aux Saccharibacterias.

Placez le tube dans un thermocycleur avec des conditions PCR réglées.

Lors de la dénaturation initiale, la chaleur lyse Saccharibacteria, libérant de l’ADN génomique. Les Actinomyces restent intacts en raison de parois cellulaires rigides, limitant la libération de l’ADN de l’hôte.

La chaleur dénature alors les brins d’ADN des Saccharibacteria et active la polymérase Taq.

Lors du recuit, les amorces se lient à des séquences complémentaires du génome de Saccharibacteria.

Par extension, la Taq polymérase ajoute des dNTP aux amorces, synthétisant de nouveaux brins d’ADN.

Chargez le produit PCR amplifié sur un gel d’agarose pré-coloré avec un colorant qui se lie aux fragments d’ADN.

Effectuez une électrophorèse et visualisez le gel sous lumière UV.

Une bande ampliconne spécifique aux Saccharibacterias confirme l’interaction hôte-pa